- I campioni di acqua devono essere concentrati per centrifugazione o per filtrazione su membrana.
- Per ridurre la flora contaminante eventualmente presente nell’acqua, i campioni possono richiedere specifici trattamenti con calore o con soluzioni acide.
- Dopo la semina su terreno selettivo incubare le piastre a 35-36°C in ambiente umido e con il 2,5% di CO2 per almeno 7-10 giorni ed esaminare giornalmente le piastre. Legionella cresce dopo 3-4 giorni di incubazione formando colonie di colore bianco - grigio, leggermente convesse e a margine netto.
- Saggiare le colonie presunte di Legionella seminandole sia su BCYE agar (terreno di crescita contenente cisteina) che su terreno privo di cisteina ed incubare a 36 °C in ambiente umido per 48 ore. Può essere utile anche effettuare una colorazione di Gram modificata (usando come colorante di contrasto fucsina fenicata di Ziehl): le legionelle appaiono come sottili bacilli debolmente colorati di rosa.
- Identificare la specie ed il sierogruppo delle colonie di Legionella isolate mediante agglutinazione al lattice o immunofluorescenza (kit disponibili in commercio). Attualmente sono disponibili anche numerose tecniche molecolari per la caratterizzazione dei ceppi di Legionella isolati dall’ambiente (così come di quelli di origine clinica), la cui applicazione richiede però personale ed attrezzature specializzate.
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